产品简介
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。土壤中性蛋白酶(S-NPT) 在中性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。本试剂盒提供了一种简单、快速的土壤中性蛋白酶(S-NPT) 检测方法，其检测原理是：中性条件下，土壤中性蛋白酶(S-NPT) 可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝；在680nm有特征吸收峰。测定680nm吸光度增加速率，来计算土壤中性蛋白酶(S-NPT) 活性。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一 | 10mL | 20mL | 4℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1瓶 | 粉剂×1瓶 | 4℃避光保存 |
试剂三 | 粉剂×1瓶 | 粉剂×1瓶 | 4℃保存 |
试剂四 | 粉剂×1瓶 | 粉剂×1瓶 | 4℃保存 |
试剂五 | 4mL | 8mL | 4℃避光保存 |
试剂六 | 2.5mL | 5mL | 4℃保存 |
标准品 | 1mL | 1mL | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见光分光光度计（能测680nm处的吸光度）
水浴锅、磁力搅拌器、低温离心机
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
去离子水
30-50目筛
试剂准备
试剂一：即用型；使用前平衡到室温；4℃保存。
试剂二：临用前48T加入3mL去离子水，96T加入6ml去离子水充分溶解；用不完的试剂4℃保存。
试剂三：临用前48T加入1mL试剂六，96T加入2mL试剂六，沸水浴加热溶解；然后48T加入4mL试剂一，96T加入8ml试剂一，充分混匀备用，用不完的试剂4℃保存。
试剂四：临用前48T加入15mL去离子水，96T加入30ml去离子水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存。
试剂五：即用型；使用前平衡到室温；4℃保存。
试剂六：即用型；使用前平衡到室温；4℃保存。
标准品：即用型；使用前平衡到室温；0.05mg/mL标准酪氨酸溶液，4℃保存。
样本制备
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30-50目筛。
实验步骤
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上，调节波长到680nm，可见光分光光度计去离子水调零。
2. 试剂二、三和四40℃水浴10min。
3. 样本测定（在EP管中加入下列试剂）：
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
风干土样(g) | 0.02 | 0.02 |
试剂一（μL） | 0 | 150 |
试剂三（μL） | 150 | 0 |
混匀后，40℃水浴30min，振荡5-6次，使土样与反应液充分接触 | ||
试剂二（μL） | 50 | 50 |
混匀，8,000g 25℃离心10min，取上清液，在EP管中依次加入下列试剂：
标准管（μL） | 空白管（μL） | 测定管（μL） | 对照管（μL） | |
上清液（μL） | 0 | 0 | 60 | 60 |
去离子水 | 0 | 60 | 0 | 0 |
标准品 | 60 | 0 | 0 | 0 |
试剂四（μL） | 280 | 280 | 280 | 280 |
试剂五（μL） | 60 | 60 | 60 | 60 |
混匀，40℃水浴20min，8,000g 25℃离心10min，取200μL于96孔板或微量玻璃比色皿，测定680nm处的吸光值。计算ΔA测=A测定-A对照，ΔA标=A标准-A空白。每个测定管需设一个对照，标准和空白只需要测一次。
注意：1.实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测小于0.005可适当加大样本量。如果A测大于2.0，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。
结果计算
单位定义：每天每g土样中产生1mg酪氨酸为一个 S-NPT活力单位U。
S-NPT(U/g土样)= C标×(ΔA测÷ΔA标)×V反总÷W÷T=18×(ΔA测÷ΔA标)
C标：标准品浓度，0.05mg/mL；V反总：反应体系总体积，0.15mL；T：反应时间，30min=1/48d；W：样本质量，0.02g。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
