产品简介
植酸酶（Phytase）又叫肌醇六磷酸酶，是一种蛋白质和糖的结合酶，是催化植酸及其盐类水解为肌醇与无机磷的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶。植酸酶能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷，极大的提高生物对养分的利用率，降低粪便中的磷含量，减轻对环境的污染，改善营养成分的吸收和利用。土壤植酸酶主要来自于土壤中的微生物，在磷素循环中起着重要作用，土壤植酸酶在土壤改良和农业可持续发展领域具有较强的应用前景。本试剂盒提供了一种简便的比色测定法，用于测定土壤中的植酸酶活性。其原理是在一定的环境条件下，土壤植酸酶可以分解植酸钠产生无机磷和肌醇衍生物，在酸性 条件下，无机磷和钼酸铵显色剂发生反应，产生蓝色的钼蓝物质，其在700nm有特征吸收峰，通过测定无机磷的含量，可计算出土壤植酸酶的活性。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
缓冲液 | 30mL | 60mL | 4℃保存 |
试剂一 | 粉剂×1瓶 | 粉剂×1瓶 | 4℃避光保存 |
试剂二 | 7.5mL | 15mL | 4℃保存 |
显色剂 | 粉剂×2瓶 | 粉剂×4瓶 | 4℃保存 |
标准品（10μmol/mL 无机磷标准液） | 1mL | 1mL | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或分光光度计（能测700nm处的吸光度）及恒温箱或水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
制冰机、低温离心机
去离子水、甲苯
30-50目筛
试剂准备
缓冲液: 即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂一：临用前48T加入15mL缓冲液，96T加入30mL缓冲液配制，现用现配；用不完的试剂4℃保存一个月。
试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
显色剂：临用前每瓶加0.8mL去离子水溶解，再加3.2mL试剂二混匀，现用现配；当天用完。
标准曲线设置：按下表所示用去离子水将10μmol/mL标准品稀释为1.6、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025μmol/mL的标准溶液。
标准品体积（µL） | 去离子水体积（µL） | 标准品浓度（μmol/mL） | |
Std.1 | 160µL 10μmol/mL | 840 | 1.6 |
Std.2 | 400µL of Std.1 | 400 | 0.8 |
Std.3 | 400µL of Std.2 | 400 | 0.4 |
Std.4 | 400µL of Std.3 | 400 | 0.2 |
Std.5 | 400µL of Std.4 | 400 | 0.1 |
Std.6 | 400µL of Std.5 | 400 | 0.05 |
Std.7 | 400µL of Std.6 | 400 | 0.025 |
样本制备
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30-50目筛
实验步骤
1. 酶标仪或分光光度计预热30min以上，调节波长到700nm, 分光光度计去离子水调零。
2. 在EP管中依次加入下列试剂：
测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 | |
样本（g） | 0.03 | 0.03 | 0 | 0 |
甲苯（µL） | 20 | 20 | 0 | 0 |
振荡混匀，室温放置15min | ||||
缓冲液（µL） | 0 | 500 | 0 | 0 |
试剂一（µL） | 500 | 0 | 0 | 0 |
混匀，37℃孵育24h，10,000g，25℃离心5min，取上清加入96孔板或微量玻璃比色皿中 | ||||
上清液（µL） | 100 | 100 | 0 | 0 |
标准液（µL） | 0 | 0 | 100 | 0 |
去离子水（µL） | 0 | 0 | 0 | 100 |
显色剂（µL） | 100 | 100 | 100 | 100 |
混匀，静置15min，测定700nm处吸光值，计算ΔA测=A测定-A对照，ΔA标=A标准-A空白。（空白和标准曲线只需测一次，每个测定管需要设置一个对照管）
注意：为保证实验结果的准确性，需先取1-2个样做预实验，如果ΔA测过高（高于1.0）可用提取液稀释样本后再测定，计算结果时注意乘以稀释倍数。
结果计算
1. 标准曲线的绘制
以标准液浓度为y轴，ΔA标为x轴，绘制标准曲线（浓度为y轴更方便计算结果）。
将 ΔA测 代入公式计算样本浓度（y，μmol/mL）。
2. 土壤植酸酶活性计算
酶活性单位定义：一定条件下，每g土壤在反应体系中每天释放1μmol无机磷为1个酶活力单位U。
土壤植酸酶活性（U/g）=y×V反总÷W÷T=0.52y÷W
V反总：反应体系总体积，0.52mL；W：土壤质量，g；T：反应时间，24h=1d。
结果展示
典型标准曲线
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
