产品简介
活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。正常情况下，细胞内抗氧化防御系统与氧自由基处于平衡状态，细胞内活性氧（ROS）水平维持在较低的生理范围；在病理情况下，细胞内抗氧化系统与氧自由基的平衡被打破，细胞内活性氧水平过多，就可破坏线粒体酶类、脂类和核酸，使机体出现氧化应激。本试剂盒提供了一荧光测定法，用于直接定量检测组织活性氧。其原理是DCFHDA ROS 探针为还原型二氯荧光素 (2',7'-dichlorodihy drofluores cin diacetate, DCFH-DA)可扩散通过线粒体膜，在线粒体内被酯酶水解，形成无荧光的DCFH，DCFH 迅速与ROS反应生成绿色荧光物—氧化型二氯荧光素(2', 7'-dichlo rofluorescin,DCF)，具有488/520nm 的最大激发/发射波长。绿色荧光强度与组织内活性氧水平成正比，检测DCFHDA产物的荧光就可以知道组织内活性氧的水平。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
提取液 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
DCFH-DA活性氧探针 | 50μL | 100μL | -20℃避光保存 |
自备耗材
荧光分光光度计、荧光酶标仪或多功能酶标仪、恒温培养箱、分析天平
全黑96孔板、可调节式移液枪及枪头
低温离心机、制冰机
纯水、PBS
匀浆器或研钵
试剂准备
提取液：即用型；4℃保存。
DCFH-DA活性氧探针：根据样本数量，临用前用纯水将DCFHDA 探针10倍稀释。充分混匀，备用，现用现配。2周内可 2-8℃保存，长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
注意：探针为DMSO 溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。 请勿一次性将探针全部稀释。
样本制备
新鲜组织样本用 PBS 洗净，称取0.1g组织，加入1mL预冷的提取液，冰浴匀浆。100×g，4℃离心3分钟，弃沉淀，取上清。
注意：推荐使用新鲜样本检测活性氧，反映的是组织当时的活性氧状态。冻存的组织样本的 ROS 在
长期冻存过程中会损失掉，已经冻存的组织样本中残余的ROS也可以用本试剂盒检测。
实验步骤
1. 荧光分光光度计、荧光酶标仪或多功能酶标仪预热30min以上，调节激发光488nm，发射光525nm。
2. 样本测定：在全黑96孔板或微量石英比色皿中依次加入190μL 匀浆上清液、10μL DCFHDA 探针，用移液器吹打，使之充分混匀。在 37℃避光孵育30分钟。孵育完成后，测定荧光强度。
注意：如荧光强度太强，超过了仪器的检测范围，可将孵育后的匀浆上清液稀释后再检测。一般稀释 5-50倍。
结果计算
组织活性氧强度=荧光强度（RFU）/质量（克）
注意：数据与样本质量的单位无关。此处以样本质量数据作为校正系数，对不同样品进行均一化处理。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
PMK0859 ROS活性氧检测试剂盒
PMK1052 羟自由基清除能力检测试剂盒（微量法）
PMK1036 超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒（微量法）
PMK1038 过氧化物酶（POD）检测试剂盒（微量法）
PMK1041 黄嘌呤氧化酶（XO）检测试剂盒（微量法）
PMK1037过氧化氢酶（CAT）检测试剂盒（微量法）
PMK1061 超氧阴离子清除能力检测试剂盒（微量法）
