脂肪酸系列

β-羟基丁酸(β-HB)检测试剂盒

货号:PMK1882
规格:48T/96T
价格:1080元/1800元
库存:99
产品描述 常见问题 参考文献 相关产品推荐



产品简介

β-羟基丁酸(β-HB;3-羟基丁酸)是酮体(或含有酮基的水溶性分子)的一种,主要在肝脏中由脂肪酸氧化产生,并输出到外周组织,作为能量来源。脂肪酸在肝内正常分解代谢后所产生的酮体,分为乙酰乙酸,β-羟基丁酸和丙酮。这三类物质互相转换,性质大致相同,但代谢途径却不一样。β-HB和乙酰乙酸将能量从肝脏输送到其他组织β-羟基丁酸占酮体总量的78%,主要存在于血液中。乙酰乙酸占酮体总量的20%,可以由尿液排出,也可转变为丙酮呼出。丙酮占酮体总量的2%,容易挥发,可通过呼吸尿液等排出体外。β-HB在食物摄入量少、低碳水化合物饮食、高脂肪饮食饥饿和长期剧烈运动期间产生。β-羟基丁酸的测定在糖尿病酮症的诊断、治疗监测中比乙酰乙酸测定更灵敏,更可靠,同样在糖尿病控制的预告中也非常有价值试剂盒提供了一种简单易用的比色法,用于分析各种生物样品中β-HB含量其原理是β-HB被β-羟丁酸脱氢酶β-HBDH氧化,产生乙酰乙酸,伴随这个反应过程NAD+被还原为NADH,NADH将WST-8原生成橙黄色formazan(甲臜),在450nm左右检测有最大吸收峰。通过测定450nm下吸光度变化来计算β-HB含量。

产品内容

试剂盒组分

规格

储存条件

48T

96T


反应缓冲液

60mL

120mL

4℃

试剂一

30μL

60μL

-20℃

试剂二

0.5mL

1mL

-20℃

试剂三

300μL

600μL

4℃,避光保存

试剂四

60μL

120μL

4℃,避光保存

β-HB标准品

粉剂×1支

粉剂×1支

4

自备耗材

酶标仪或可见光分光光度计(能测450nm处的吸光度)

恒温箱、制冰机、低温离心机

96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头

去离子水

匀浆器(如果是组织样本)

试剂准备

注意:各组分(小管试剂)开盖前,请先低速离心。

反应缓冲液:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

试剂一: 使用时,用反应缓冲液进行 1:20稀释,整个实验过程中,冰上避光放置。现用现配,用多少配多少;保存于-20℃。

试剂二: 即用型;整个实验过程中,冰上放置;分装保存于-20℃。

试剂三: 即用型;整个实验过程中,冰上避光放置;4℃,避光保存

试剂四: 即用型;整个实验过程中,冰上避光放置;4℃,避光保存

工作液:每孔准备85µL工作液,现配现用:吸取61µL反应缓冲液8µL试剂二, 5µL试剂三, 1µL试剂四和10μL稀释后的试剂一混合均匀。

β-HB标准品10mgβ-HB,临用前0.793mL反应缓冲液得100mM标准品分装保存于-20℃。100mM标准品反应缓冲液1:50稀释,建议取10μL 100mM标准品,490μL反应缓冲液稀释至2mM,混合均匀。

标准曲线设置:按下表所示,用反应缓冲液2mM标准品稀释为210.50.25、0.125、0.0625、0.0313 mM的标准溶液。


标准品体积(µL)

反应缓冲液体积(µL)

标准品浓度(mM)

Std.1

400µL 2mM

0

2

Std.2

200µL of Std.1

200

1

Std.3

200µL of Std.2

200

0.5

Std.4

200µL of Std.3

200

0.25

Std.5

200µL of Std.4

200

0.125

Std.6

200µL of Std.5

200

0.0625

Std.7

200µL of Std.6

200

0.0313

样本制备

组织:称取约0.1g样本,加入1mL反应缓冲液,冰浴匀浆,12,000g,4℃离心10min,取上清液,置冰上待测。

细胞或细菌:收集500万细胞或细菌到离心管内,用冷PBS清洗细胞或细菌,离心后弃上清,加入1mL 反应缓冲液,冰浴超声波破碎细胞或细菌5min(功率20%或200W,超声3s,间隔7s,重复30次),然后12,000 g,4℃离心10min,取上清液,置冰上待测。

血清、血浆等液体样本:可直接用来检测,或者如果有必要,建议将样本根据预实验结果用反应缓冲液稀释后再进行检测。

注意:建议使用新鲜样本。如果不立即使用,可将样品在-80下保存6个月。大多数样本含有内源性β-羟丁酸脱氢酶β-HBDH可降解β-HB,制备好的样本应尽快检测,或通过10kDa MW 离心式过滤器(超滤管)过滤,取滤液,以去除所有蛋白质,然后-80℃保存

实验步骤

1. 酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上,调节波长到450nm,可见光分光光度计去离子水调零。

2. 操作表(下述操作在96孔板或微量玻璃比色皿中操作):

试剂(μL)

空白孔

标准孔

测定孔

对照孔

样本

0

0

20

20

标准品

0

20

0

0

反应缓冲液

20

0

0

0

工作液

80

80

80

0

反应缓冲液

0

0

0

80

3. 混匀后,37℃避光孵育30min,测定450nm处吸光度,空白孔记为A,标准孔记为A,测定孔记为A,对照孔记为A。计算ΔA=A-AΔA=A-A(空白和标准曲线只需做1)。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于0.001可适当加大样本量。如果ΔA大于2.0,样本可用反应缓冲液进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数,或减少提取用样本量。

 

 

结果计算

1. 标准曲线的绘制

以标准溶液浓度为y轴,ΔAx轴,绘制标准曲线(浓度为y轴更方便计算结果)

2. 含量的计算

将样本的ΔA代入方程得到y值(1mM=1μmol/mL)。

1)按样本鲜重计算

β-HB含量(μmol/g 鲜重)=y×V÷(W×V÷V样总) ×n=y÷W×n

2)按样本体积计算

β-HB含量(μmol/mL)=y×V÷V×n=y×n

3)按细胞数目计算

β-HB含量(μmol/104 cells)=y×V÷(细胞数量×V÷V样总)×n=y÷500×n=0.002×y×n

V:加入样本体积,0.05mL;W:样本质量,g;V样总:加入反应缓冲液体积,1mL;n:样本稀释倍数; Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;500:细胞数量500万

结果展示

典型标准曲线-以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。

image

注意事项

1. 实验过程中请穿实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。

2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。

3. 试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储

4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。

5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。

 

SIGNUP FOR OUR NEWSLETTER
Subscribe free newsletter to get latest products and discount information.

武汉普美克生物技术有限公司 © All Rights Reserved. 地址:武汉市东湖高新区自贸生物创新港B区N803-804

电话:400-0698-668  手机:  Email:bioprimacy@aliyun.com

鄂ICP备17001029号-1