丙酮酸脱氢酶(PDH;EC 1.2.4.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,分布在线粒体基质中,是由三个酶组合的复合体,负责催化丙酮酸脱羧,生成乙酰辅酶A的不可逆反应。PDH是丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)催化丙酮酸氧化脱羧的限速酶,催化丙酮酸脱羧生成羟乙基-TPP,把糖酵解和三羧酸循环连接起来。本试剂盒提供了一种简单、方便、快速的PDH活性检测方法,其原理是PDH催化丙酮酸脱氢,同时还原WST-8产生黄色物质,从而导致450nm光吸收的增加。通过检测450nm吸光值的增加既可计算PDH活性。
酶标仪或分光光度计(能测450nm处的吸光度)
96孔板或微量比色皿、可调节式移液枪及枪头
水浴锅、制冰机,低温离心机
去离子水
匀浆器
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答:可能的原因包括培养基质量、血清质量、温度、pH值、气体比例等。
解决方法有:
1. 使用高质量的培养基和血清,确保其无菌、无支原体污染,并保证在保质期内使用;
2. 培养箱温度和气体比例要保持稳定,定期校准;
3. 每天检查并记录细胞培养的环境参数,如温度、pH值、气体比例等,以便及时发现问题;
4. 定期更换培养基,保持细胞营养充足;
5. 对于生长缓慢的细胞株,可以尝试进行克隆筛选或更换培养基。
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