本产品转膜快速,安全无毒害。使用本快速转膜液时,在400mA恒流转膜约20-25分钟即可将聚丙烯酰胺凝胶上的蛋白转移至PVDF膜或硝酸纤维素膜(NC膜)等印迹膜上,并且产热少,转膜效果好。而相同的条件下使用传统的转膜液需要转膜更长时间。本产品适合手工配制的Tris-Gly和Hepes等缓冲系统的SDS-PAGE凝胶的转膜,也适合Tris-Gly、Hepes和BisTris系统等预制胶的转膜,使用后转膜液可以回收,回收后可以再使用1-2次。
a.使用前混匀即可用于转膜,如果Western快速转膜液使用前4℃预冷,转膜效果更好。没有用完的快速转膜液可在常温或4℃保存,通常两周内可以正常使用。当转膜液颜色变为浅棕色或黄褐色时,应该丢弃。
b.400mA恒流,20-25分钟完成转膜,推荐使用恒流转膜。对于大分子量蛋白,可适当增加转膜时间。由于使用本产品时产热少,转膜时可以仅在转膜槽内用冰盒降温即可。如果同时将整个转膜槽置于冰浴中降温,转膜效果更佳。
1.如果转膜液颜色变成浅棕色或黄褐色,应该丢弃。
2.由于使用本产品时产热较少,转膜时可以仅在转膜槽内用冰盒降温即可。如果同时将整个转膜槽置于冰浴中降温,转膜效果更佳。同时也可以考虑转膜液配制好后先在4℃或者冰浴预冷。
3.使用本产品转膜时,如果设定恒流为400mA,无论是同一个转膜槽中1或2块胶转膜,电压在开始时通常为200V左右。由于转膜过程中,转膜液温度会逐渐升高,电阻变小,所以结束时电压通常为100-150V。转膜效率和电场强度(electric field strength, 用E表示)相关,而电场强度主要和电压及电极之间的距离相关,即E=U/d。
4.由于用于转膜的电源品牌和型号的不同,一方面高电流差异较大,另一方面功率也会有较大差别。通常大功率的电源相对贵一些,也更适合用于转膜。有些电源会自动降低电压或电流,有些则会报错并停止转膜。对于出现停止转膜的情况,需要调低电流或电压,或者选择功率更大的电源。
5.转膜时转膜液的温度、凝胶的参数(如数量、厚度、离子浓度、丙烯酰胺浓度等)、滤纸的厚度、同时使用的转膜槽数量、转膜液的离子浓度、转膜液的体积、转膜液使用的次数等都可能会影响电流和电压。如果需要同时使用2个或以上的转膜槽,建议使用高电流的大功率电源,或者设定较低的电流或电压进行比较长时间的转膜。
6.转膜时,如果出现报错而停止,需要根据情况查看是否是电压或电流过载,或者是如转膜液过多或过少、转膜槽的短路或断路等异常情况。
7.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
8.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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