结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维:胶原纤维、网状纤维、弹力纤维,而胶原纤维(collagen fiber)是分布广、含量多的一种纤维。Masson 三色染色又称马松染色,是结缔组织染色中经典的一种方法,是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关:分子的大小由分子量来体现,小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织;而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而,淡绿或苯胺蓝的分子量都很大,因此 Masso染色后肌纤维呈红色,胶原纤维呈绿色(淡绿)或蓝色(苯胺蓝),主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
Masson三色染色的特点:①染色稳定;②分化时间短,1~2s;③色彩清晰鲜艳;④适用范围广,适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色;⑤所染切片保存时间长且不易褪色。
1、 切片脱蜡应尽量干净。固定起着重要的作用,使用不同的固定液可延或缩短染色时间。
2、 取 A1、A2 等量混合即为 Weigert 铁苏木素染液,一般 24h 失去染色力。
3、 酸性乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织的类别和新旧而定。
4、 弱酸溶液可使色彩更清晰鲜艳,如使用量大可自行配制 0.1~0.3%乙酸溶液予以替代。
5、 磷钼酸分化时要在镜下控制,分化到胶原纤维呈淡红色、纤维呈红色即可。分化时间根据染色深浅而 定,一般 1~2min。
6、 Masson 蓝化液亦可自行配制 Scott 促蓝液或 0.1~1%碳酸锂水溶液予以替代。
如果每次的使用量很小,可以适当分装后再使用。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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答:如果能够排除下面的几个问题,那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。
1、二抗的HRP 活性太强,将底物消耗光;
2、ECL底物中H2O2不稳定,失活;
3、ECL底物没覆盖到相应位置;
4、一抗选择不当;
5、二抗失活。
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