DNA loading buffer和蛋白 loading buffer的区别?

发布人: 发布时间:2025.04.23

DNA Loading Buffer 和蛋白 Loading Buffer 都是生物学中常用的上样缓冲液,不少同学常常将它们弄混,今天给大家详细讲解一下DNA Loading Buffer 和蛋白 Loading Buffer 的区别。


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用途


1.DNA Loading Buffer: 用于琼脂糖凝胶电泳,与DNA样品混合后可直接点样。

2.蛋白 Loading Buffer: 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳,与蛋白样品混合后需要煮沸才可点样。

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成分及作用


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DAN Loading Buffer 

DNA Loading Buffer的主要成分为溴酚蓝、二甲苯氰、甘油、EDTA。

(1) 溴酚蓝和二甲苯氰都可以作为指示剂,便于观察样品是否跑出凝胶,从而及时结束电泳。(注:在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中,溴酚兰的迁移分别与1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同;二甲苯氰在1%和1.4%琼脂糖中电泳时,其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似。)

(2) 甘油可以增加样品的密度,使样品密度大于TAE电泳缓冲液,从而沉降到点样孔的底部,便于点样。

(3) SDS使DNA聚合酶变性,从而和DNA解离,避免DNA聚合酶与DNA结合减缓DNA的迁移率。

(4)EDTA可以能够与各种金属阳离子形成高度稳定的水溶性络合物,防止DNA降解。




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蛋白 Loading Buffer

蛋白 Loading Buffer的主要成分为:Tris-HCl(pH6.8)、SDS、甘油、β-巯基乙醇、溴酚蓝。

(1) Tris-HCl:维持pH稳定。

(2) 溴酚蓝起到指示剂的作用,同时溴酚蓝也是pH指示剂,在pH 3.0~4.6范围,颜色由黄变蓝。

(3) SDS能够结合蛋白质,使各种蛋白质—SDS复合物带有等量的负电荷,掩盖了不同种蛋白质间原有的电荷差别,从而使蛋白能够在电场的作用下向同一方向迁移。

(4) 甘油的作用也是增加样品的密度,使样品沉入点样孔中。

(5) β-巯基乙醇是常用的强还原剂,能够破坏蛋白质的二硫键,使蛋白质结构线性化。蛋白质的迁移率只受到其分子量的影响,分子量越大,迁移越慢。

总结


DNA Loading Buffer 用于DNA电泳,成分简单,主要增加密度和指示进程。蛋白 Loading Buffer 用于蛋白质电泳,成分复杂,包含变性剂和还原剂,确保蛋白质线性化和带负电。两者不可互换,需根据实验类型选择。大家能否正确区分呢?


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