蛋白质的磷酸化和去磷酸化控制了细胞分化、增殖、信号传导和凋亡等过程,磷酸基团的共价结合可以改变蛋白的构象和配基的结合能力, 动物细胞或组织蛋白提取的过程中,磷酸化蛋白质容易被胞体和外源性磷酸酶降解。
磷酸酶抑制剂(50×)为多种磷酸酶抑制剂混合液,可有效抑制酪氨酸磷酸酶、丝氨酸磷酸酶、苏氨酸磷酸酶、酸性和碱性磷酸酶等各种磷酸酶。适用于动物细胞或组织蛋白的提取,能大程度地保持蛋白质磷酸化,常用于动物细胞或组织中蛋白激酶活性和信号传导的研究。该试剂仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
按照缓冲液:磷酸酶抑制剂(50×)=49:1的比例,配制1×的含磷酸酶抑制剂的工作液,或者直接把磷酸酶抑制剂加入所需工作液中混匀即可。
尽量减少反复冻融的次数,以免失效。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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